酶联免疫试剂盒操作：牛水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）酶联免疫分析试剂盒

阅读次数：1550    发布时间：2017/12/29 12:03:45

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中牛水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中牛水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）的存在与否。

牛水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）酶联免疫分析试剂盒操作步骤

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

牛水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）酶联免疫分析试剂盒计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD值<临界值（CUTOFF）者为水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）阴性

阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为水泡性口炎病毒抗体（VSV-Ab）阳性。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月

原创作者：上海润裕生物科技有限公司